ACTO PRIMERO (En el patio del palacio del magistrado supremo en Venecia). Se celebran las fiestas populares con motivo del día de las regatas. Gioconda, una cantante callejera, rechaza las propuestas amorosas de Barnaba, espía de la Inquisición, que, para vengarse, dirige su ira contra la madre ciega de la muchacha, a la que acusa de hechicería. Interviene Enzo, un joven genovés recién llegado a Venecia, que oculta su indentidad con una máscara y se mezcla con el pueblo. Llega en esos momentos Alvise Badaero, uno de los jefes de la Inquisición.